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3α-羥基類固醇脫氫酶—9028-56-2

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中文：3α-羥基類固醇脫氫酶

英文：3α-HSD

CAS：9028-56-2

分子式：E.C.1.1.1.50

純度：≥90%

中文同義詞：3α類固醇脫氫酶,3α羥基類固醇脫氫酶,3ALPHA-羥基類固醇脫氫酶,3a-羥基類固醇脫氫酶,3a-羥類固醇脫氫酶

英文同義詞：3α-HSD,3α-Hydroxysteroid Dehydrogenase,Dehydrogenase, 3a-hydroxy steroid,3alpha-Hydroxy steroid dehydrogenase

技術(shù)指標(biāo)

外觀:白色無定型凍干粉末;蛋白純度:≥90%;比活性:≥25 U/mg酶粉;葡萄糖6磷酸脫氫酶:≤0.01%;乳酸脫氫酶:≤0.005%;谷氨酸脫氫酶:≤0.001%;蘋果酸脫氫酶:≤0.01%;己糖激酶:≤0.01%

酶學(xué)性質(zhì)

來源:微生物;分類:EC 1.1.1.50;分子量:30 kDa(SDS-PAGE);等電點(diǎn):5.2;Km值:3.6×10-5 M(雄酮)，4.7×10-5 M(NAD+);抑制劑:Cu2+，Ag+，Hg2+，Zn2+，F(xiàn)e3+;最適pH:8.5-9.5;

最適溫度:55℃;pH穩(wěn)定性:6.0-9.0(25℃,16 h);熱穩(wěn)定性:37℃以下穩(wěn)定(pH 9.0,30 min);穩(wěn)定性:-25～-15℃靜置保存12個(gè)月保持90%以上活性;保護(hù)劑:BSA.

用途:用于總膽汁酸（TBA）試劑的研發(fā)和大量制備。

酶活定義:單位酶活定義為在下述條件下，每分鐘催化生成1μmol NADH所需的酶量。

試劑準(zhǔn)備

試劑I：0.1 M焦磷酸鈉（用HCl調(diào)pH至8.9）。

試劑II：將319 mg NAD+溶解至25 mL雙蒸水中，用固體NaHCO3調(diào)節(jié)pH至7.0-7.5，用雙蒸水定容至30 mL。

試劑III：將30mg溶解至100mL甲醇中。

酶稀釋液：10mM Tris-HCl，pH 9.0。

操作步驟

1.向3 mL比色皿中依次加入2.6 mL試劑I，0.2 mL試劑II，0.1 mL試劑III，混勻。

2.將反應(yīng)混合物在25℃預(yù)熱5 min。

3.向反應(yīng)混合物中加入0.1 mL酶液，混勻，

25℃反應(yīng)，并用分光光度計(jì)在340 nm下，記錄1 min內(nèi)的吸光度變化（ΔAs）

*用酶稀釋液替代酶液，其它步驟相同，所得溶液吸光度為空白吸光度（ΔAb）ΔA=ΔAs-ΔAb